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DNA鉴定-石蜡包埋、固定组织DNA的提取
来源:北京亲子鉴定中心
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      人体病理组织最常用的固定剂是福尔马林,其他固定剂如乙醇等也有应用。不同固定剂对DNA分析结果的影响差异很大。福尔马林类固定剂对结果影响很大,而乙醇或含乙醇类固定剂对结果的影响较小。
固定时间越长,DNA抽提率越低,对扩增结果影响越大,常规制片中透明用的二甲苯也可破坏DNA。10%中性甲醛液和丙酮对DNA的扩增结果影响相对较小。
     组织切片中DNA的提取方法1:
      (1)将组织切片剥离在1.5ml的离心管内,在管中加约Iml辛烷,混匀,盖紧后室温放置30min。
      (2) 12000r/min离心Smin,弃去上清,沉淀为组织和残存的石蜡。小心吸去壁上残存的辛烷。重复上述步骤一  次,以彻底去除石蜡。
      (3)加0.5nd无水乙醇,混匀。12000r/min离心Smin,弃去上清,小心吸去乙醇。重复前一步,尽可能除去壁上残存的乙醇(乙醇漂洗可以除去辛烷)。真空干燥或风干,使乙醇完全挥发。
      (4)向上述干燥样品中加入100一200rul消化液(50mmol/L Tris - HCl pH9.0,10mmol/L EDTA,5% Tween - 20,10mg/ml蛋白酶K)。55℃温浴3h或37℃温浴道夜。
      (5)短暂离心,使盖上和壁上蒸发冷凝的水分沉至管底。95℃温浴l0min,灭活蛋白酶K。离心后分装上清(每份1~10µl),- 20℃保存。
      1.保存太久或较脆的组织在加入辛烷脱蜡后就会破碎,操作应小心以防组织丢失。
      2.干燥样品时,用封口膜封住离心管,并在其上打几个小孔,以防止样品间的交叉污染和来自真空干燥盖上的杂质污染。
      3.干燥样品时,也可向每管中加3滴丙酮,不加盖,小心置于37—500C温浴中以促进丙酮挥发,同时也可除去残存的乙醇。
      4.上述操作的混匀步骤不要用旋涡振荡器混匀,以免机械剪切力造成DNA片段断裂。
 

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