DNA鉴定之毛发的DNA提取方法

来源：北京亲子鉴定中心

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毛发分毛根、毛干、毛尖三部分。毛根含有染色体DNA，但自然脱落的毛发根部含染色体DNA量极少。毛干部分含有线粒体DNA，随着近年来测序技术的发展，通过毛干mtDNA测序作个体识别已经成为较常见的技术。

（一）毛根DNA提取

1．有机提取法：

(1)取带毛根的毛发1根用乙醚洗涤去油脂，乙醇清洁表面，干燥。

(2)将单个发根剪入1.5ml离心管中，加入100µl TES(100mmol/L NaCl，10mmol/L EDTA，10mmol/L Tris - HCl pH8.0)、10% SDS 10µl和10mg/ml蛋白酶K 1µl，混匀，55℃水浴2h或37℃温浴过夜。

(3)用等体积饱和酚、酚／氯仿、氯仿各抽提一次。

(4)加1/10体积3mol/L醋酸钠（pH5.2），2倍体积预冷无水乙醇，混匀，沉淀DNA。10000r/min离心10min，弃去上清。

(5)真空干燥，10µl消毒去离子水溶解DNA备用。

2．Chelex - 100提取法

将0.5cm发根剪入1.5ml离心管中，灭菌水、乙醇分别清洗两次，晾干后加入5﹪Chelex - 100 50µl～100µl，以下步骤同Chelex - 100提取血液DNA。

3．直接煮沸法

将单个毛根剪入1.5ml离心管中，灭菌水、乙醇分别清洗两次，晾干后加入50µl～100µl灭菌水，沸水煮10min，4℃备用。

（二）毛干mtDNA提取

1．取lcm长毛干，用乙醇擦拭，放人1.5ml离心管中。

2．灭菌水、无水乙醇分别浸泡两次，每次10min。

3．晾干后如入64µl TES(10mol/L Tris pH8.0，10mmol/L EDTA，100mmol/L NaCl)，10﹪SDS 20µl，10mg/ml蛋白酶K8µl，1mmol/L DTT 8µl，混匀，37℃温浴消化过夜。

4．待毛干消化完全后，等体积酚氯仿抽提，收集上清备用。

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